目前，2014采購計劃申報工作已經結束，今年有不少用戶對**的Western Blot分析儀器非常感興趣。但在于用戶溝通過程中，我們發現大家對怎樣選擇多色熒光凝膠成像系統，多不甚清楚，在是選擇多色熒光凝膠成像還是化學發光凝膠成像這個問題上，有些糾結。我想主要是因為介紹這兩種技術和設備的文章較少有關，為此，我們僅以有限的知識在此為大家拋磚引玉，希望能對今后的選擇提供些建議。
首先，我們先分別對化學發光成像和多色熒光凝膠成像的特點和應用做簡要介紹。
一、化學發光凝膠成像的特點：
化學發光是在一些特殊的化學反應中吸收了反應釋放的化學能,而處于電子激發態的反應中間體或反應產物由激發態回到基態時所產生的一種光輻射,化學發光分析是根據化學反應產物的光輻射(化學發光)確定物質含量的一種痕量分析方法。它的特點是靈敏度高和線性范圍寬, 不需要任何光源,只需要高靈敏度的光電轉換元件和電子放大裝置,因而儀器設備簡單,操作簡便,分析快速,易于實現自動化和連續分析,而且可與其它分析方法聯合使用,進一步拓寬其應用范圍。
在Western雜交檢測中，目前*主要的檢測方法有化學發光Chemilumin escent和底物顯色Colormetirc/Chromogen，其中前者靈敏度很高——隨著各大廠家努力開發研制靈敏度更高的發光底物，化學發光法的靈敏度已經達到pg級別，甚至還有 Femto級別的，靈敏度超過了同位素，已經成為了Western雜交*常規的檢測方法。*常用的化學發光標記酶是辣根過氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase，屬于過氧化物酶POD類）和堿性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase）。
傳統的化學發光檢測方法通常需要膠片成像，膠片成像可以保證較高的靈敏度，但也有很多缺點：耗時，需要暗房和顯影劑，膠片很貴，而且需要很多消耗品，需要持續購買。另外，用膠片上的蛋白條帶進行定量也是幾乎不可能，和目測一塊考馬斯藍染的膠沒什么區別，而且膠片成像時間只能預先設定，如果曝光過度或者不足則需要再次進行實驗，非常麻煩。
數字成像系統的出現極大克服了傳統膠片法的一些弊端，近年來隨著冷卻CCD技術的發展，數字成像系統成本越來越低，成像效果同時獲得大大提升，因而CCD成像系統逐漸成為了實驗室Western Blot的主要設備。同時目前很多Western blot的新技術也都是針對CCD成像系統的，目前CCD成像系統的靈敏度已經可以達到甚至超過傳統的膠片成像。冷卻型CCD照相機與X膠片相比具有瞬時影像處理、高靈敏度、高分辨率、動力學范圍廣等優點，而且還不需要膠片處理裝置、后續耗材投入及暗室。
二、多色熒光凝膠成像
在做western blot的檢測時，有時會碰到電泳后兩個分子量相近的蛋白分離不開，距離相近或者重疊，例如磷酸化和非磷酸化的蛋白；或者是同一次實驗中，檢測一種以上的蛋白抑或是利用內參蛋白對目的蛋白的定量分析進行標準化。遇到以上這樣的實驗需求，化學發光的檢測方**顯得繁瑣復雜，其必須經過剝脫抗體和重行孵育新抗體的過程，不僅耗時費力，而且不能進行**的定量分析，由此多色熒光成像的技術應運而生。多色熒光凝膠成像，是利用不同的熒光染料（如Cy2 ,Cy3, Cy5）標記二抗，標記不同熒光染料的二抗分別對應不同的目的蛋白，以此實現通過檢測不同熒光染料的信號強度，間接實現一次實驗可檢測多種蛋白，同時也可以進行**的定量分析。
通過上面的介紹，我們知道多色熒光凝膠成像系統，同化學發光凝膠成像系統一樣，也是Western Blot檢測分析儀器的一種，它很好的解決了化學發光凝膠成像系統不易解決的問題，某種程度上，我們可以認為它是化學發光凝膠成像的一個很好的補充，畢竟，化學發光是Western Blot應用*廣的的主要儀器。所以，一款優良的多色凝膠成像系統，不僅僅是有著優良的多色熒光凝膠成像所必須的光源、CCD、鏡頭和分析軟件，也要考慮到對化學發光凝膠成像高靈敏度的需求。如此，怎樣選擇多色熒光凝膠成像系統的問題，就不再糾結了。
下面以*早推出多色熒光凝膠成像系統的ALPHA公司的FluorChem Q為例，簡要介紹系統的設計特點。
FluorChem Q是ALPHA公司2008年新推出的一款集多色熒光、化學發光以及可見光檢測于一體的成像系統，是在其**化學發光成像系統HD2基礎上增加了用于多通道熒光檢測三色LED光源，并將濾光片位置從5個增加至6個，同時，Alphaview Q軟件具有多通道熒光成像捕獲和分析功能。這些改進和設計體現了其強大的多色熒光成像和分析功能。
1、 雙反射高強度三色LED燈：3個波長(475nm, 534nm, 632nm)的激發熒光 (Cy3, Cy5, Cy2)光源加上FluorChem HD2本身具有的雙波長（302nm和365nm）紫外透射燈，可實現*多5種熒光染料的檢測。
2、 濾光片位置從FluorChem HD2的5個增加至6個，為多色熒光成像系統提供更多種類光通道的需求。
3、 Alphaview Q軟件具有多通道熒光成像捕獲和分析功能，可自動切換激發光源和濾光片，完成多通道熒光圖像的的拍攝。獨特的channel view功能，可以單獨觀察每個熒光通道的圖像；流水線式的定量分析多色熒光條帶或斑點。
保證了FluorChem Q能夠進行多色熒光所需的*少3通道熒光程序，至少對2種目的蛋白的檢測，同時有第3個蛋白做對照。
同時，Alphaview Q的基本光學成像配置即FluorChem HD2的化學發光凝膠成像系統，
已是化學發光成像的**配置，即1英寸CCD尺寸，**-25℃的CCD制冷溫度，420萬像素的分辨率，50mm 0.95的大光圈鏡頭，以及*高可達8×8的CCD像素合并模式和特有的Movie Mode功能等等，通過綜合調高這些參數，使其具有極高的化學發光成像靈敏度，*高可達20f克，超過了同位素方法。
不難看出，多色熒光凝膠成像系統FluorChem Q的突出特點是具有*多可進行5種熒光染料的檢測和分析，可同時實現4種蛋白的高靈敏度定量分析。但，如不考慮多色熒光的功能，其本身也是一套具有極高靈敏度的**化學發光凝膠成像系統，因為，不論是功能上的應用目的還是硬件配置上的使用目的，化學發光凝膠成像都可謂其基礎?？傊?，依目前的Western Blot實驗方法和技術能力，多色熒光凝膠成像系統仍只是化學發光凝膠系統的應用補充與配置升級。