細胞分選是細胞生物學、分子生物學*重要的技術方法及必要前提,根據細胞的類型及后續試驗目的,目前技術比較成熟且應用較廣泛的主要有:密度梯度離心法、**密度離心法、**磁珠法和流式技術等。隨著科技的不斷進步,相信各種方法越來越完善,同時一些新的方法也在研究之中,如微芯片CHIP技術。
其中,**磁珠技術因具有特異性好、靈敏度高、分選速度快、使用方便、成本低、應用廣等特點,自應用推廣以來受到廣泛而大量的應用,目前已經成為*主要的細胞分選方法。
本文以問答的方式,就**磁珠細胞分選過程中常見的問題略做說明,希望能給您帶來些幫助!
首先,了解**磁珠技術的原理:
1、基于抗體對抗原的特異性識別;
2、磁性微珠直接或者間接偶聯在抗體上,從而與細胞相連進行標記(如下圖);
3、在高強度、梯度磁場中標記的細胞被磁性吸附,未標記細胞首先流出,然后洗脫被吸附的細胞(陽性分選)達到細胞磁性分離的目的。
下面我們了解關于**磁珠細胞分選過程中常見的問題:
1、都能分選哪些細胞?
答:理論上可以分選所有的細胞,但需要根據所分選細胞的特性開發出相應抗體的磁珠。實際上,目前市場上已經進行能夠購買到幾乎所有常用的細胞分選磁珠(市場上應用*多的為德國美天旎Miltenyi磁珠,種類*為齊全)。
2、需要哪些設備和試劑耗材?
答:需要的設備有:分選器(提供磁場)、分選架(為分選器提供支撐的支架);所需耗材有:分選柱(細胞分離及洗脫的容器)和磁珠。根據分選方式、分選量以及操作方式德國美天旎Miltenyi提供多種類型分選器(Mini**磁珠細胞分選儀、Midi**磁珠細胞分選儀、Mini&Midi**磁珠細胞分選儀、Super**磁性細胞分選儀、Vario**磁性細胞分選儀以及autoMACSTM Pro全自動**磁珠分選儀),其中手動方法分選*常用的的是Mini&MidiMACS分選器,autoMACSTM Pro全自動**磁珠分選儀則大量應用于醫院等大量分選細胞的單位。 3、分選柱是否可重復使用?
答:分選柱屬耗材,不可長久重復使用,可處理后重復使用2-5次。處理方法:將長試管注滿PBS,回抽柱子的活塞,倒出回抽液。倒入新的PBS,打出之;重復兩次---此時基本上將柱子內的雜細胞除盡。再抽、打兩三次無水酒精或95%酒精,然后置于50-60度烘箱,過夜,即能防止生銹。
4、一支分選柱能分選多少細胞?
答:根據柱子種類不同,具體能分選的細胞數目同,基本數量應在107~1010間。詳細信息請咨詢經銷商或查看說明書材料。
5、一瓶磁珠能使用多久?或能分選多少細胞?
答:一瓶2ml裝大約可以分選109個細胞。
6、分選的細胞純度是多少?
答:良好的實驗條件及正確的操作下,一般的純度都在90%以上。
7、一次分選所需時間?
答:手動操作在30分鐘內可完成分選,自動分選2.5-10分鐘即可。
8、分選后的細胞可以進行哪些應用?
答:美天旎MiltenyiMACS技術,不活化細胞,不改變細胞功能,分選細胞活性好,可用于進一步的細胞培養或細胞與分子水平的分析。
9、與Veridex公司的Cellsearch 系統的區別是什么?
答:兩者作用和應用范圍都不相同。美天旎Miltenyi**磁珠分選技術主要是對細胞進行分選,使用簡單,操作便利,幾乎可應用到所有的細胞,且設備與耗材價格更能普及;而Cellsearch 系統主要是應用于外周血循環腫瘤細胞的分析,其CellTracks®AutoPrep®系統本身即是一個全自動**細胞分選儀,能很好的富集CTC,
而CellTracks®Analyzer II系統是一臺光學分析系統屬于細胞分析儀器,所以Cellsearch 系統是為臨床檢查、診斷服務的醫療設備,儀器耗材的價格昂貴,適用CTC的分選試劑(磁珠抗體)種類單一,不能廣泛應用于細胞分選實驗。
10、 有哪些不足?或不能進行哪些分選?
答:主要有兩種細胞不能分選:a、不能根據細胞大小分選細胞;b、不能分選在胞內表達某種蛋白的活細胞(GFP等)。